miR-124-1促进大鼠骨髓间充质干细胞神经分化的实验研究

miR-124-1 promotes neural differentiation of rat bone marrow mesenchymal stem cells

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摘要目的探讨miR-124-1在大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)神经分化中的作用.方法构建大鼠miR-124-1慢病毒载体及Anti-rno-miR-124* Inhibitor载体,体外感染大鼠MSCs,筛选最适感染复数(MOI).实验分为对照组(未行感/转染组)、miR-124-1+组(感染miR-1 24-1慢病毒)及miR-124-1 -组(转染Anti-rno-miR-124*Inhibitor).采用β-巯基乙醇诱导MSCs分化为神经细胞.倒置荧光显微镜下观察感染后荧光表达情况,MTT法检测感/转染后各组细胞存活率；免疫细胞化学法、RT-PCR法、Western blot法检测各组诱导6d后神经细胞标记物β3微管蛋白( β3 tubulin)、神经微管结合蛋白(MAP-2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化.结果倒置荧光显微镜下观察大鼠miR-124-1慢病毒感染成功,MOI值为30.miR-124-1+组慢病毒载体感染MSCs 2 d后,实时定量PCR显示miR-124-1的表达显著上调(P＜0.01)；Anti-rno-miR-124* Inhibitor载体转染24h后,细胞存活率下降,实时荧光定量PCR显示转染后miR-124-1的表达显著下降(P＜0.01).β-巯基乙醇可诱导MSCs分化为神经细胞,miR-124-1+组诱导6d后细胞的β3 tubulin、MAP-2表达率显著高于其他两组(P＜0.01),miR-124-1 -组β3tubulin、MAP-2的表达率显著低于对照组(P＜0.01)；各组GFAP表达率均较低(＜1％).结论 miR-124可能促进大鼠MSCs的神经分化.