换一批Tissue-SELEX技术筛选靶向动脉粥样硬化组织的核酸适配体
Tissue-SELEX for screening nucleic acid aptamers targeting atherosclerotic tissue
摘要[目的]采用指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选并鉴定特异性结合小鼠动脉粥样硬化(As)病理组织的核酸适配体,为开发As发生早期的分子靶标及诊断试剂提供研究基础.[方法]构建库容量为1015～1016的单链DNA(ssDNA)文库,与小鼠正常血管组织切片结合-洗脱(反筛),洗脱后的文库再与小鼠As血管冰冻切片结合-洗脱(正筛).PCR扩增正筛和反筛产物,琼脂糖凝胶电泳验证扩增产物.筛选结束后对PCR扩增产物进行T-A克隆及测序,获得核酸适配体的一级结构,Mfold在线软件预测二级结构.将筛选出的核酸适配体5'-端标记FAM荧光基团,与正筛和反筛冰冻切片结合,荧光显微镜观察荧光强度,Image Pro Plus 6.0计算相对平均荧光强度,评价核酸适配体结合的特异性.[结果]经过8轮筛选,琼脂糖凝胶电泳成像显示正筛产物泳道出现PCR扩增产物,而反筛产物泳道并无PCR扩增产物,表明成功获得特异性结合As组织的核酸适配体;经T-A克隆及测序鉴定出5条核酸适配体,预测的二级结构均具有茎-环结构;免疫荧光染色验证5条核酸适配体与As血管均有不同程度的结合,相对平均荧光强度定量结果显示核酸适配体No.11的相对平均荧光强度数值最高,可作为候选核酸适配体用于后续研究.[结论]成功获得特异性结合As血管的核酸适配体,为下一步筛选As发生早期的分子靶点,以及开发体内早期诊断试剂提供研究基础.
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关键词
动脉粥样硬化指数富集的配体系统进化技术核酸适配体atherosclerosissystematic evolution of ligands by exponential enrichmentnucleic acid aptamers
栏目名称
DOI
10.20039/j.cnki.1007-3949.2025.11.003
发布时间
2025-12-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
桂林市科技计划项目（2020011206-3）
广西自然科学基金项目（2024GXNSFBA010210）
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