换一批西部马脑脊髓炎病毒实时荧光RT-PCR检测方法建立及标准质控品制备
Development of the Real-time RT-PCR for Detection of Western Equine Encephalomyelitis Virus and Preparation of Reference Materials for Quality Control
摘要选取西部马脑炎病毒代表株进行序列比对分析，选择保守区域，设计合成引物和TaqMan探针。经对反应体系和条件进行优化，建立了检测西部马脑炎病毒的实时荧光RT-PCR检测方法，应用建立的方法对西部马脑炎病毒核酸、东部马脑炎病毒核酸、马动脉炎病毒核酸、马疱疹病毒1型核酸、马流感病毒H3N8亚型核酸进行检测，结果表明建立的方法只能检出西部马脑炎病毒核酸，与另外4种病毒核酸无交叉反应。进一步通过体外转录制备了西部马脑炎病毒McMillan株7442~10011的cRNA片段，经拷贝数计算、稀释、分装、均匀性和稳定性检验后，作为质控品对建立的方法进行评价。结果显示，所建立的方法其分析灵敏度可达10拷贝。对197份进口马血样品检测用时仅4小时，表明该检测技术快速、灵敏、特异。因此，本研究建立的方法可作为技术储备用于进口马匹的疫病筛查。
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关键词
西部马脑炎病毒实时荧光RT-PCR标准质控品Western equine encephalomyelitis virusReal-time RT-PCRReference materials for quality control
分类号
S852.65
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1005-944X.2013.11.026
发布时间
2013-12-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
公益性行业科研专项（201010033）
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