换一批
换一批基因Ⅵ型新城疫病毒反转录数字PCR检测方法的建立与应用
Establishment and Application of RT-dPCR Assay for Detecting Newcastle Disease Virus Genotype Ⅵ
摘要基因Ⅵ型新城疫病毒(NDV)是导致我国当前鸽新城疫流行的主要基因型.国家新城疫参考实验室监测数据表明,鸽NDV分离率近年来有上升趋势.为了实现基因Ⅵ型NDV快速检测和精确定量,针对国内流行的基因Ⅵ型NDV F基因保守区域设计特异性引物和探针,建立了反转录数字PCR(RT-dPCR)方法,并对该方法的灵敏度、特异性和重复性进行了评估.结果显示,建立的RT-dPCR方法线性关系良好,灵敏度高,最低检测限为1.97 copies/μL;特异性强,与其他基因型NDV强毒株和常见禽病病毒无交叉反应;重复性好,变异系数为2.2％.利用本方法对临床采集的180份鸽口咽/泄殖腔拭子样品进行检测,检测结果与病毒分离结果一致.以上结果表明,本研究建立的RT-dPCR方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于基因Ⅵ型NDV的快速检测和精准定量,同时也为基因Ⅵ型NDV核酸标准物质研制奠定了基础.
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