换一批
换一批A型塞内卡病毒VP3蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
Prokaryotic Expression of the VP3 Protein of Senecavirus A and Preparation of Its Polyclonal Antibodies
摘要为制备A型塞内卡病毒(SVA)VP3蛋白多克隆抗体,采用同源重组技术将SVA VP3基因连接至原核表达载体pET-28a中,构建了重组表达质粒pET-SVA-VP3.将重组质粒转化至大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),以1 mmol/L的IPTG进行诱导表达并纯化表达产物,随后将纯化的VP3重组蛋白皮下多点注射新西兰白兔制备多克隆抗体,利用间接ELISA、间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot分别对抗体效价、反应性和特异性进行鉴定.结果显示:重组VP3 蛋白以包涵体形式表达,相对分子质量约 36 kDa;制备的VP3 蛋白多克隆抗体能与VP3 重组蛋白和SVA发生特异性反应,其ELISA效价达 1:10 000 以上,Western blot和IFA效价达 1:5 000.综上,本研究成功制备了SVA VP3 多克隆抗体,其具有较高的效价和特异性,可为后续SVA致病机制及检测方法等研究奠定基础.
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关键词
A型塞内卡病毒VP3蛋白原核表达多克隆抗体效价特异性SVAVP3 proteinprokaryotic expressionpolyclonal antibodytiterspecificity
分类号
S852.65
栏目名称
技术支撑
DOI
10.3969/j.issn.1005-944X.2024.04.018
发布时间
2024-05-11
基金项目
山西省科技创新人才团队专项
山西省优秀博士来晋奖励基金项目
山西农业大学博士科研启动基金项目
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