换一批
换一批NoV G Ⅱ.2亚型RT-RPA-CRISPR/Cas12a检测方法的建立
Establishment of RT-RPA-CRISPR/Cas12a Assay for Norovirus G Ⅱ.2
摘要近年来,一种新的诺如病毒G Ⅱ.2 亚型(norovirus G Ⅱ.2,NoV G Ⅱ.2)通过牡蛎等生食海鲜感染人群,引发急性胃肠炎,并在全球广泛传播.为实现NoV感染的现场诊断和快速疫情响应,亟需建立快速便捷的NoV G Ⅱ.2 亚型核酸检测方法.本研究通过设计引物、crRNA,经优化反应条件后,建立了NoV G Ⅱ.2 亚型RT-RPA-CRISPR/Cas12a检测方法.结果显示:利用引物NoV-G Ⅱ.2-F1B和NoV-G Ⅱ.2-R1对NoV G Ⅱ.2标准RNA进行RT-RPA扩增,结合crRNA1 介导的CRISPR/Cas12a报告体系,能在 40 min内完成NoV G Ⅱ.2核酸检测;该方法检测灵敏度为10 copies/μL,且与轮状病毒、腺病毒、星形病毒、人副肠孤病毒、博卡病毒和札如病毒无交叉反应;应用该方法和qRT-PCR法,分别对30份临床模拟样本进行检测,发现总符合率达96.67%.结果表明,本研究建立的NoV G Ⅱ.2亚型RT-RPA-CRISPR/Cas12a检测方法无需依赖昂贵设备,具有灵敏度高、特异性强、操作便捷快速等特点,为NoV G Ⅱ.2 感染的现场检测和防控提供了新方法.
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关键词
NoV G Ⅱ.2亚型反转录重组酶聚合酶扩增CRISPR/Cas12a系统快速检测NoV G Ⅱ.2 subtypereverse transcription recombinase polymerase amplificationCRISPR/Cas12a systemrapid detection
分类号
S852.6
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1005-944X.2024.08.017
发布时间
2024-09-02
基金项目
国家市场监管总局科技计划项目（2021MKl07）；
西安市未央区科技计划项目（202208）
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