换一批
换一批表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组火鸡疱疹病毒构建及应用
Construction and Application of Recombinant Herpesvirus of Turkey Expressing HA Gene of Subtype H9 Avian Influenza Virus
摘要为构建表达H9 亚型禽流感病毒HA基因的重组火鸡疱疹病毒(herpesvirus of turkey,HVT),以连续覆盖HVT全基因组的Fosmid文库为基础,利用Red/ET同源重组技术和Gateway LR克隆技术,将优化的携带Pec复合启动子的HA基因插入到HVT复制非必需区HVT053 与HVT054 位点处的 95 318～95 319 nt之间,获得了表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组HVT(rHVT-H9-HA株),并对构建的毒株进行鉴定.结果显示,成功构建了含有HA基因的入门质粒pEntr-HA,通过Gateway克隆的LR反应将含有HA基因的表达盒转移到黏粒pFosC DEST的第 53 和 54 号基因之间形成pFosC HA;提取 5 个黏粒后,转染次代CEF细胞获得拯救重组病毒rHVT-H9-HA株.连续传代和动物试验结果表明,rHVT-H9-HA株毒价高,遗传稳定,可以克服母源抗体干扰,免疫持续期长,能够提供针对H9亚型禽流感的保护;同时也实现了一针防两病,效果明显优于灭活疫苗.本研究为H9亚型禽流感病毒重组HVT活载体疫苗的研制提供了技术支撑.
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关键词
重组毒株rHVT-H9-HA火鸡疱疹病毒HA基因Red/ET同源重组技术Gateway LR克隆技术recombinant rHVT-H9-HA strainHVTHA geneRed/ET homologous recombination technologyGateway LR cloning system
分类号
S855.3
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1005-944X.2024.09.022
发布时间
2024-10-16
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