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牛多杀性巴氏杆菌OmpA抗原间接ELISA方法的建立

Establishment of an Indirect ELISA for OmpA Antigen of Pasteurella multocida bovis

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摘要为建立一种快速检测牛多杀性巴氏杆菌的方法,分析多杀性巴氏杆菌OmpA序列信号肽与跨膜疏水区序列,对选择的目的基因片段进行稀有密码子优化,将化学合成后的核苷酸序列连接至pET32a载体上,构建相应的重组质粒pET32a-OmpA;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞株中,经扩大培养成功诱导表达出了纯度较高的包涵体OmpA蛋白,将OmpA重组蛋白作为诊断抗原,经反应条件优化建立了间接ELISA抗体检测方法.经试验验证,该方法对其他相关的牛类病原无交叉反应,阳性血清稀释度为 1:256 时仍呈阳性,组内与组间变异系数均低于 10%.结果表明,该方法特异性与敏感性较好,且具有良好的重复性与稳定性.本研究为进一步开发成熟的牛多杀性巴氏杆菌抗体检测试剂盒奠定基础.

作者王润清 ^[1] 孙航 ^[1] 孙雨 ^[1] 李歌 ^[1] 李琦 ^[2] 侯晓林 ^[3] 阚威 ^[4] 学术成果认领

作者单位中国动物疫病预防控制中心,北京 102600;北京农学院动物医学院,北京 100096 ^[1] 中国动物疫病预防控制中心,北京 102600 ^[2] 北京农学院动物医学院,北京 100096 ^[3] 甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州 730070;青海省动物疫病预防控制中心,青海西宁 810000 ^[4]

关键词牛多杀性巴氏杆菌 OmpA蛋白原核表达蛋白纯化 ELISA Pasteurella multocida bovis OmpA protein prokaryotic expression protein purification ELISA

分类号 S851.3

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DOI 10.3969/j.issn.1005-944X.2025.02.015

发布时间 2025-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

基金项目

现代农业产业技术体系（CARS39）