换一批流产衣原体微滴式数字PCR定量检测方法的建立及应用
Establishment and Application of a Droplet Digital PCR Assay for Quantitative Detection of Chlamydia abortus
摘要为建立一种基于微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)的高特异性、高灵敏度,且可绝对定量检测流产衣原体(Chlamydia abortus,C.abortus)的方法,针对流产衣原体ompA基因设计特异性引物和探针,建立并优化ddPCR反应条件,并对该方法的特异性、灵敏度以及重复性进行评估.结果显示,所建立ddPCR方法的最低检测限为1.76 copies/μL,灵敏度高;与贝氏柯克斯体、牛分枝杆菌、动物布鲁氏菌、李氏杆菌、金黄色葡萄球菌、鹦鹉热衣原体均无交叉反应,特异性强;组内和组间重复试验变异系数均小于10%,重复性好.用建立的ddPCR方法检测20份疑似感染临床样品,发现其检出率高于荧光PCR方法.结果表明,本研究建立的ddPCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为流产衣原体感染的快速诊断和精准防控提供了有效手段,具有广泛的应用前景.
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