换一批摘要为建立一种可定量检测鲤浮肿病毒(carp edema virus,CEV)的方法,以CEV P4a基因作为靶基因设计并合成引物和探针,经优化反应体系和退火温度,建立了与实时荧光PCR有良好线性关系的微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)方法,并进行了灵敏度、特异性、重复性验证.最后,将建立的方法应用于临床样品检测.结果显示:当引物、探针浓度分别为1.10、0.30μmol/L,退火温度为53 ℃时,扩增效率最高,且阴阳性微滴分布界限最为明显,检测限低至0.38 copies/μL;CEV核酸拷贝数浓度为0～7.48×104 copies/μL时,ddPCR与实时荧光PCR检测的线性关系较好(R2=0.992 9),变异系数较低(2.61％);与其他10种常见水生动物疫病病原的阳性核酸均无交叉反应;在155份临床样品检测中,检出阳性样品2份,与实时荧光PCR的检出率相当;在8份能力验证样品检测中,检出阳性样品3份,与能力验证"满意"结果一致.结果表明,本研究建立的CEV ddPCR方法灵敏度高、特异性强、重复性好,为CEV定量检测和低病毒载量样品检测提供了技术支持.
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分类号
S852
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1005-944X.2025.12.016
发布时间
2026-01-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
东莞市省乡村振兴战略专项（20211800400112）
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