摘要PPE61是结核分枝杆菌特有的PPE蛋白家族成员,它的可变C端与分泌特性暗示其在免疫逃逸和宿主互作中起关键作用.然而,该蛋白对呼吸道屏障上皮细胞的具体功能未知.本研究通过体外试验,旨在阐明PPE61对人支气管上皮细胞(BEAS-2B)增殖的调控作用及其在感染早期的分子机制,为结核病诊断与疫苗研发提供理论依据.采用生物信息学软件预测PPE61蛋白的基本生物学性质,基于NCBI数据库获取结核分枝杆菌PPE61基因及其编码蛋白序列信息.通过PCR从卡介苗(BCG)基因组中扩增出PPE61基因,并构建了重组表达质粒pET22b(+)-PPE61,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)宿主中进行蛋白表达.通过SDS-PAGE和Western blot验证蛋白表达及抗原性;采用CCK-8法检测不同质量浓度(2.5～20 μg/mL)PPE61处理BEAS-2B细胞24h的增殖活性,应用qPCR分析TGF-β基因表达水平.结果显示:PPE61基因扩增后全长1 287 bp,编码406个氨基酸,该蛋白无信号肽和跨膜区,预测含37个磷酸化位点,41个B细胞抗原表位和35个T细胞抗原表位,二级结构以α-螺旋(49.26％)为主;经SDS-PAGE分析发现该蛋白以包涵体形式存在,相对分子质量为105.652 18×105,与预期大小相符合,说明重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后,能诱导表达目标蛋白.Western blot证实PPE61抗原具有特异性;其浓度依赖性抑制细胞增殖(P≤0.000 1),可显著上调TGF-β表达(P＜0.05).结果表明:PPE61蛋白具备丰富的抗原表位和高可溶性表达特性,预示其拥有良好的免疫原性与开发潜力,为筛选结核病诊断标志物和研发新型亚单位疫苗提供了新靶点,奠定了重要的试验基础.