换一批艰难梭菌双重实时荧光PCR检测方法的建立及初步应用
Establishment and Preliminary Application of a Duplex Real-time Fluorescent PCR Assay for Clostridium difficile
摘要为建立一种快速检测艰难梭菌(Clostridium difficile)两种毒素基因的方法,参照GenBank上发布的艰难梭菌基因组序列,以tcdA和tcdB为靶基因设计特异性引物和TaqMan探针,经过优化引物、探针浓度以及反应条件,建立了可以同时检测两种毒素基因的艰难梭菌双重实时荧光PCR方法.该方法与其他菌株无交叉反应,特异性强;组内和组间试验变异系数均小于5％,具有良好的重复性;对tcdA和tcdB重组质粒的最低检测限分别为9.94和9.63 copies/μL,具有较高的灵敏度.应用本试验建立的方法对180份口岸截获的两栖、爬行类活体动物以及市场售卖宠物的粪便样品进行检测,发现2份宠物犬粪便样品呈阳性,提示该菌在宠物群体中存在传播风险.结果表明,本研究建立的方法适用于出入境检验检疫、医疗、食品、疾控等领域中动物源艰难梭菌的快速检测,为防范该菌危害人类和动物健康提供了技术支撑.
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分类号
S852.6
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1005-944X.2026.02.017
发布时间
2026-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家重点研发计划（2022YFD1800705）
中国海关科学技术研究中心自立课题项目（2023HZ12）
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