换一批MIRA-LFD可视化快速检测副溶血弧菌方法的建立
Development of a MIRA-LFD Visual and Rapid Method for Vibrio parahaemolyticus
摘要副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)对人类健康和水产养殖业健康发展构成了严重威胁.为建立一套简便高效的副溶血弧菌可视化快速检测技术,联用多酶等温快速扩增技术(multienzyme isothermal rapid amplification,MIRA)与侧向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD),选取该菌pR72H片段作为检测靶标,设计并合成特异性引物与探针,通过优化筛选反应温度与时间参数,验证与海水养殖品种中其他常见病原的交叉反应,评估对不同浓度菌液及副溶血弧菌DNA的灵敏度,开展批内与批间重复性验证及模拟样品检测等步骤,最终建立了MIRA-LFD检测方法.结果显示:MIRA反应的最优条件为42 ℃恒温扩增18 min;该方法与8种其他常见病原不存在交叉反应;对副溶血弧菌DNA的最低检出限可达800 pg/μL,细菌的最低检出浓度为102 cfu/mL(102cfu/反应);批内与批间各3次重复性验证结果一致;模拟样品检测结果显示,添加100 cfu/mL目标菌的组织样品经6 h富集后即可检出阳性信号.综上,本研究建立的MIRA-LFD副溶血弧菌检测方法具备操作简便、检测耗时短、灵敏度与特异性高等优势,为基层实验室及养殖现场开展快速检测提供了有效的技术手段.
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分类号
S851
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1005-944X.2026.03.015
发布时间
2026-04-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家重点研发计划（2024YFD2401200）
浙江省尖兵领雁+X研发攻关计划项目（2024C02005）
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