换一批摘要背景与目的体外基因定点突变是分子生物学实验的常用方法。然而，虽然目前已经报道了多种基因突变的方法，但对于在长的载体序列中引入突变，一般的方法并不太容易实现。方法本研究在我们前期报告的基因突变方法的基础上，描述了一种简单易操作的可在长序列中引入定点突变的方法。这个方法的基本实验程序是：①确定待突变区域，合成一对均含有Type IIs类限制性内切酶位点载体引物，并合成一对互补的突变单链；②在突变区域之外的合适位置上，选择一个桥点，并合成一对均含有Type IIs类的限制性内切酶位点的桥点引物；③利用载体引物序列和桥点引物序列做PCR反应，以扩增载体序列中突变区域外的序列；④利用相应的Type IIs类的限制性内切酶，对以上扩增产物进行酶切；⑤将酶切产物和两个突变单链复性成的突变双链连接，形成突变载体，并转化进受体菌作克隆鉴定。结果为证明我们所报告的方法的有效性，我们在长的载体中进行了测试，结果显示，不但实验操作简单易行，而且突变效率可达到90%以上。结论我们提供了一种有效的在长载体中进行定点突变的方法。
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关键词
定点突变长载体Type IIs类限制性内切酶桥点引物Site-directed mutagenesisLarge vectorType IIs endonucleaseBridge primer
栏目名称
DOI
10.3779/j.issn.1009-3419.2014.07.12
发布时间
2014-08-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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