钙结合蛋白S100A8/A9阻滞剂对人子宫内膜异位症在位内膜间质细胞系hEM15A的作用效果
Effect of calcium binding protein S100A8/A9 blocker on eutopic endometrial stromal cell line hEM15A in human endometriosis
摘要目的 探讨S100钙结合蛋白A8/A9(S100 calcium binding protein A8/A9,S100A8/A9)阻滞剂对异位子宫内膜细胞的作用效果.方法 以不同浓度的S100A8/A9蛋白的特异性阻滞剂帕奎莫德(ABR-25757)作用异位子宫内膜细胞(hEM15A)24 h后,通过细胞计数试剂盒-8(CCK8)法检测ABR-25757作用后细胞形态及细胞增殖活力,从4个梯度浓度中筛选出ABR-25757作用的最佳浓度.分为实验组(hEM15A+ABR-25757)和对照组(hEM15A+同体积PBS).最佳浓度的ABR-25757作用hEM15A细胞24 h后,采用Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR,qPCR)检测细胞血管内皮生长因子(VEGF)及转化生长因子β1(TGF-β1)表达水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测细胞培养上清液VEGF及TGF-β1水平.结果 ①以100、200、400、800 μg/mL等不同浓度梯度ABR-25757作用hEM15A细胞24 h后,与对照组相比,不同浓度ABR-25757组均可降低hEM15A细胞增殖活力(100 μg/mL组:P<0.05;其余浓度组:P<0.01).由于200 μg/mL浓度作用效果明显,且细胞死亡少,故选择200 μg/mL为最佳浓度;②ABR-25757作用细胞后与对照组相比,hEM15A细胞迁移和侵袭能力明显减弱(P<0.01);③ABR-25757 作用hEM15A细胞后VEGF和TGF-β1的mRNA表达水平均低于对照组(VEGF:P<0.01,TGF-β1:P<0.05);④ABR-25757作用后细胞培养上清液VEGF和TGF-β1水平均低于对照组(VEGF:P<0.01,TGF-β1:P<0.05).结论 ABR-25757是S100A8/A9的一种特异性抑制剂,能有效抑制异位内膜细胞的增殖、降低异位内膜细胞迁移和侵袭能力,以及有效下调VEGF、TGF-β1的表达.
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