换一批重组分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白和CFP32的表达及其抗原性
Clone and expression of CFP10-ESAT6 fusion protein and CFP32 protein of Mycobacterium and their antigenicity
摘要目的 重组表达结核分枝杆菌CFP10和ESAT 6的融合蛋白及卡介苗(BCG)CFP32,分析其抗原性.方法 用重组PCR从结核分枝杆菌标准株H37Rv基因组DNA中扩增获得融合基因cfp10-esat6;从BCG基因组DNA中扩增cfp32基因.经克隆和测序分析后,分别亚克隆至表达载体pQE-30和pET-23a(+),在大肠埃希菌BL21中表达重组蛋白,予以纯化、鉴定,Western blot和间接E1.ISA分析重组蛋白的抗原性.结果 构建了重组表达质粒pQE30-cfp10-esat6和pET-cfp32,表达了CFP10-ESAT6融合蛋白和CFP32.CFP10-ESAT6蛋白表达量约占菌体总蛋白的15.2%,纯化后蛋白纯度约为92%,浓度为0.456g/L;CFP32蛋白表达量约占菌体总蛋白的10.6%,纯化后蛋白纯度约为90%,浓度为0.310g/L.纯化CFP10-ESAT6融合蛋白和CFP32检测结核病的敏感性分别为85.7%和71.4%,特异性均为100%.结论 重组表达获得具有良好抗原性的重组融合蛋白CFP10-ESAT6和重组蛋白CFP32.
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