换一批
换一批辐射对沉默ATRX的H460细胞增殖以及DNA损伤修复的影响
The effects of radiation on proliferation and DNA damage repair in H460 cells silenced ATRX
摘要目的 探讨辐射对沉默ATRX的肺癌H460细胞增殖和DNA损伤修复的影响及二者的关系.方法 靶向ATRX的3个慢病毒载体转染293T细胞后,慢病毒感染H460细胞,获得ATRX低/无表达的细胞株shATRX1-H460、shATRX2-H460和shATRX3-H460,并以shControl-H460作为对照,利用Western blot检测沉默效率.分别以克隆形成实验检测细胞增殖,免疫荧光技术检测γH2AX和Rad51焦点数,同时以Western blot检测PARP1、γH2AX和Rad51蛋白的表达.结果 shControl-H460细胞中可见ATRX表达,而shATRX1-H460、shATRX2-H460和shATRX3-H460细胞中ATRX表达均出现不同程度的降低.克隆形成实验显示,shATRX2-H460和shATRX3-H460细胞的存活分数(survival fraction,SF)均较shControl-H460细胞降低.shControl-H460和shATRX3-H460细胞经4Gy照射后1h,γH2AX焦点最多,而3 h时Rad51焦点最多,而后均降低,与shControl-H460细胞比较,在1和6h时shATRX3-H460细胞γH2AX焦点,以及1、3和6h时Rad51焦点显著增加(P＜0.05,P＜0.001).而且shATRX3-H460细胞中PARP1、γH2AX和Rad51蛋白在3和6h时均较shControl-H460细胞表达增加.结论 成功地获得靶向沉默ATRX的细胞模型,辐射后细胞增殖能力降低,可能与DNA损伤修复能力降低有关.
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分类号
Q691
栏目名称
放射生物学/论著
DOI
10.13491/j.issn.1004-714x.2019.04.004
发布时间
2019-11-28
基金项目
国家自然科学基金项目资助课题
吉林省卫生计生青年科技骨干培养计划项目
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