氨基糖甙类药物恢复HERG通道无义突变体的功能

Aminoglycosides Restore The Functional Expression Of Truncated HERG Channels Produced By Nonsense Mutations

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摘要目的本研究旨在探讨氨基糖甙类药物对纯合和杂合的HERG无义突变体的作用效应.方法采用聚合酶链反应法制备HERGR1014X突变体,并克隆至真核细胞表达载体中.将突变体的cDNA瞬时转染至HEK293细胞,应用全细胞膜片钳技术记录通道电流.药物拯救采用将转染24h后的HEK293细胞在含G-418或庆大霉素(终浓度为400μg/mL)的培养液中孵育24h.结果 R1014X能表达典型的HERG样电流,尽管与野生型(wild type,WT)HERG相比,最大尾电流幅值明显F降(3.9±1.4 pA/pF,n=8,vs.47.8±6.3 pA/pF,n=12,P＜0.01).经过G-418和庆大霉素干预后,R1014X的最大尾电流密度分别增加至12.7±3.3 pA/pF(n=7,P＜0.05)和18.3±3.7 pA/pF(n=8,P＜0.05).药物干预使R1014X的激活动力学特性亦得到恢复.Western blot和共聚焦检测进一步证实,氦基糖甙类能促进全长的HERG通道蛋白的表达.G-418和庆大霉素对杂合的WT/R1014X通道作用效应不同:庆大霉素能使WT/R1014X的电流增加2.2倍(n=12,P＜0.05),G-418却无明显效应.结论氯基糖甙类药物能恢复无义突变的HERG通道的功能性表达,且对纯合和杂合通道均有效,这为遗传性心律失常的治疗提供了新的思路.

作者滕思勇 ^[1] 姚艳 ^[2] 王可 ^[3] 李宁 ^[3] 张银辉 ^[3] 惠汝太 ^[1] 浦介麟 ^[4] 学术成果认领

作者单位中国医学科学院阜外心血管病医院心内科,北京,100037 ^[1] 首都医科大学附属北京安贞医院心内科 ^[2] 中国医学科学院阜外心血管病医院病理生理中心,北京,100037 ^[3] 100037,北京,中国医学科学院阜外心血管病医院心内科;100037,北京,中国医学科学院阜外心血管病医院病理生理中心 ^[4]

关键词长QT综合征2型 HERG 无义突变药物拯救氨基糖甙类药物

主题词药用制剂(Pharmaceutical Preparations)密码子, 无义(Codon, Nonsense)综合征(Syndrome)庆大霉素类(Gentamicins)突变(Mutation)

分类号 R9

栏目名称 基础研究

发布时间 2011-06-08

基金项目

国家973重点基础研究项目 国家自然科学基金项目