换一批人冠状病毒HCoV-HKU1和HCoV-NL63双重实时荧光RT-PCR检测方法的研究
Study of multiplex real-time RT-PCR method for the detection of HCoV-HKU1 and HCoV-NL63
摘要目的 建立一种快速、灵敏、高效的人冠状病毒HKU1 (HCoV-HKU1)和NL63 (HCoV-NL63)双重实时荧光RT-PCR检测方法.方法 根据GENBANK数据库中HCoV-HKU1和HCoV-NL63的基因序列,利用BIOEDIT5.0软件进行序列比对分析,选择基因组的保守序列,并借助引物设计生物信息学软件,设计筛选出一套针对HCoV-HKU1和HCoV-NL63双重实时荧光PCR扩增的引物.从特异性、最低检测限、重复性等方面进行评估,建立了HCoV-HKU1和HCoV-NL63双重实时荧光PCR检测方法.结果 分别以HCoV-HKU1和HCoV-NL63质粒为模板,HCoV-HKU1和HCoV-NL63双重实时荧光PCR方法的最低检测量分别为4.96×102 copies/ml和4.96×102 copies/ml.该方法针对其他病原微生物及人类基因组无反应信号,特异性好.4个梯度稀释质粒样本的4次重复检测Ct值变异系数均＜5％,重复性好.结论 HCoV-HKU1和HCoV-NL63双重实时荧光RT-PCR方法准确性好、灵敏度高、稳定性好,在临床鉴别诊断和口岸冠状病毒的监测中具有很好的应用前景.
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