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丹酚酸A调控miR-940与miR-576-5p促进退变终板软骨细胞修复的作用研究

Salvianolic acid A contributes to cartilage endplate cell restoration by regulating miR-940 and miR-576-5p

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摘要目的:观察丹酚酸A(salvianolic acid A,SAA)对退变终板软骨细胞(cartilaginous endplates cells,CEPCs)的干预作用,及其调控的潜在非编码RNA(micro-RNA,miRNA)作用靶点.方法:从腰椎间盘手术标本中分离CEPCs,用不同浓度SAA(2、5、10 μM处理24、48、72 h,利用CCK-8检测细胞活性确定SAA的最适剂量和干预时间.通过阿利新蓝染色和对血小板反应蛋白解整合素金属肽酶-5(A disintegrin and metalloproteinase withthrombospondin-5,ADAMTS-5)、基质金属肽酶 3(matrix metallopepridase 3,MMP-3)、Ⅱ 型胶原 a1(clollagen type Ⅱ a1,Col2a1)的蛋白表达检测,分析SAA对IL-1β诱导的退变CEPCs的干预作用.进一步结合生信分析,以及实时荧光定量PCR(quantitative real-time,qRT-PCR)与 Western blot 检测,并应用 miRNA 模拟物(miR-mimics)与抑制剂(miR-inhibitor),验证 SAA对潜在靶miRNAs的调控作用.结果:10μM SAA处理48 h显著提高了 CEPCs活性,增加了白细胞介素(interlenkin-1β,IL-1β)所抑制的糖胺聚糖积累与Col2a1表达,并降低了细胞基质中ADAMTS-5与MMP3表达(P＜0.05).通过生物信息分析筛选与差异基因表达检测,确定了 SAA的潜在靶miRNAs为miR-940和miR-576-5p.进一步在SAA处理组中加入 miR-940-mimic 或 miR-576-5p-mimic,与 SAA 处理组相比过表达 miR-940 或 miR-576-5p 后 CEPCs 基质中ADAMTS-5与MMP3表达显著升高,Col2a1表达显著降低.结论:SAA能够提高CEPCs活性,改善退变CEPCs的基质成分表达,而SAA的调控作用与抑制miR-940和miR-576-5p表达有关,两者可能是SAA调节CEPCs退变的作用靶点.

作者展嘉文 ^[1] 王尚全 ^[1] 陈明 ^[1] 孙凯 ^[2] 于杰 ^[2] 李玲慧 ^[1] 魏戌 ^[3] 孙武 ^[4] 陈忻 ^[4] 蔡楚豪 ^[5] 张伟业 ^[5] 韩涛 ^[1] 尹煜辉 ^[5] 唐彬 ^[4] 朱立国 ^[2] 学术成果认领

作者单位中国中医科学院望京医院运动医学中心,北京 100102;中医正骨技术北京市重点实验室,北京 100102 ^[1] 中医正骨技术北京市重点实验室,北京 100102;中国中医科学院望京医院脊柱二科,北京 100102 ^[2] 中国中医科学院附属望京医院学术发展处,北京 100102 ^[3] 中国中医科学院望京医院脊柱二科,北京 100102 ^[4] 中国中医科学院望京医院运动医学中心,北京 100102 ^[5]

关键词椎间盘丹酚酸A 终板软骨细胞细胞外基质 micro-RNA Intervertebral disc Salvianolic acid A Cartilaginous endplates cells Extracellular matrix Micro-RNA

分类号 R336（人体生理学）

栏目名称

基础研究

DOI 10.12200/j.issn.1003-0034.2023.10.014

发布时间 2023-11-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）