脱水淫羊藿素对髓核间充质干细胞增殖和细胞外基质合成代谢的影响
Effects of anhydroicaritin on the proliferation and extracellular matrix synthesis of nucleus pulposus mesenchymal stem cells
摘要目的:研究脱水淫羊藿素(AHI)对髓核间充质干细胞(NPMSCs)增殖和细胞外基质(ECM)合成代谢的影响.方法:分离和培养NPMSCs,通过流式细胞术鉴定细胞表面抗原,采用CCK-8法检测AHI对NPMSCs增殖的影响,采用集落形成实验检测AHI对NPMSCs集落形成能力的影响.通过加入TNF-α诱导体外建立NPMSCs退变模型,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测NPMSCs中细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)2、CDK4和CDK6 的表达,采用Western blot检测CDK2、CDK4和CDK6的蛋白水平,观察AHI对CDK的影响及NPMSCs的增殖机制.采用RT-PCR检测NPMSCs中COL2A1、SOX9和ACAN的表达,采用Western blot检测SOX9和ACAN蛋白水平,观察AHI对ECM合成代谢的作用机制.结果:AHI促进NPMSCs增殖,增强NPMSCs集落形成的数量.AHI上调CDK2,CDK4和CDK6 mRNA的表达,且CDK2,CDK4和CDK6蛋白水平增高.同时AHI促进COL2A1、SOX9和ACAN的表达,SOX9和ACAN的蛋白水平显著增高.结论:AHI在一定浓度范围内能够通过调控CDK2、CDK4和CDK6促进NPMSCs增殖,通过调控SOX9和ACAN促进ECM合成代谢.
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