换一批hsa-miR-655靶向调控绝经后骨质疏松症肾阴虚证关联基因CLCF1的实验研究
Experimental study on the hsa-miR-655 targeted regulation of the CLCF1 gene in postmenopausal osteoporosis associated with Kidney Yin deficiency
摘要目的 研究靶向调控绝经后骨质疏松症肾阴虚证关联基因CLCF1的microRNAs.方法 通过生物信息学预测可能与CLCF1基因3'非编码区(3'Non encoding area,3'UTR)作用的miRNAs;将人工合成的野生型和突变型CLCF1基因3'UTR区序列克隆至荧光素酶报告质粒;将重组荧光素酶报告载体和miRNAs表达载体共转染293T细胞,用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性,验证miRNA对CLCF1基因翻译水平的抑制作用.结果 生物信息学预测结果显示,CLCF1基因3'UTR与hsa-miR-655、hsa-miR-300、hsa-miR-381、hsa-miR-374c、hsa-miR-515等5个miRNAs存在互补结合位点;双荧光素酶实验结果表明,与对照组比较,hsa-miR-655组荧光活性下调至33.09％,差异有显著性意义(P=0.001),当使用突变型CLCF1基因3 'UTR,荧光活性上调至67.22％,说明hsa-miR-655对CLCF1 3'UTR的基因表达水平有显著抑制作用;与对照组比较,hsa-miR-374c和hsa-miR-515组荧光活性分别下调27.27％ (P=0.000)和27.74％(P=0.006),二者对CLCF1 3'UTR的基因表达水平有一定抑制作用;hsa-miR-300和hsa-miR-381组与对照组相比,荧光活性分别下调6.35％ (P =0.213)和9.89％ (P =0.127),二者对CLCF1 3'UTR的基因表达无明显抑制作用.结论 hsa-miR-655通过靶向结合CLCF1 mRNA的3'UTR区,在转录后水平负性调控绝经后骨质疏松症肾阴虚证关联基因CLCF1的表达.
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关键词
中西医结合肾阴虚证绝经后骨质疏松症CLCF1基因微小RNA3'非编码区荧光素酶报告系统Integrative medicineKidney Yin deficiencyPostmenopausal osteoporosisCLCF1 genemicroRNAs3'Non encoding areaDualluciferase assay
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1006-7108.2016.08.001
发布时间
2016-10-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（81403420）
福建省卫生厅青年科研课题（2013-2-73）
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