由Th17/Treg细胞免疫平衡探讨金刚丸对去势大鼠的骨保护机制
Exploring the bone protective mechanism of Jingang Pills on OVX rats based on Th17/Treg cell immune balance
摘要目的 从Th17/Treg细胞免疫平衡的角度探讨温补肾阳方药金刚丸干预绝经后骨质疏松症的作用机制.方法 40只雌性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、戊酸雌二醇组[0.1 mg/(kg·d)]、金刚丸等效剂量组[3.6 g/(kg·d)]、金刚丸高剂量组[7.2g/(kg·d)],各8只,采用双侧卵巢摘除术造模.药物干预3个月后收集大鼠双侧股骨、脾脏及血液,采用Mirco-CT检测骨微结构,抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP)观察破骨细胞数量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中IL-17、IL-10水平,流式细胞术检测大鼠血液和脾脏的Th17/Treg细胞比例,实时荧光定量聚合酶链式反应法(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(WB)分别检测骨组织ROR-γt、Foxp3的mRNA和蛋白表达.结果 与模型组比较,金刚丸能显著提高去势大鼠骨组织BMD、BV/TV、Tb.N(P<0.01),降低Tb.SP(P<0.01),改善骨小梁结构;能有效降低去势大鼠骨组织中破骨细胞数量;能显著降低去势大鼠血清IL-17水平(P<0.01),提高IL-10水平(P<0.01);能显著降低去势大鼠血液和脾脏CD4+IL-17A(Th17)比率(P<0.01),提高CD4+CD25+Foxp3(Treg)比率(P<0.01);并显著降低股骨中ROR-γt的mRNA和蛋白水平(P<0.01),提高Foxp3的mRNA和蛋白水平(P<0.01).结论 金刚丸可通过抑制破骨细胞活性而有效改善去势大鼠的骨丢失,其作用机制与调节Th17/Treg细胞平衡密切相关.
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