法舒地尔调控Klotho抑制甲状旁腺激素诱导的肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化研究

Inhibition of parathyroid hormone-induced epithelial-mesenchymal transition by fasudil through modulation of Klotho

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摘要目的研究法舒地尔在调控Klotho抑制甲状旁腺激素(PTH)诱导的肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化(EMT)中的作用.方法采用第3代人肾小管上皮细胞,分为5组,经不同浓度法舒地尔进行处理,用倒置显微镜观察细胞形态变化,采用蛋白免疫印迹法(Western-blot)测定细胞中Klotho蛋白的表达情况,实时定量PCR法(RT-PCR)测定Klotho mRNA、间充质细胞标志物α-SMA mRNA和上皮细胞标志物E-cadherin mRNA表达情况,并观察量效关系.结果正常肾小管上皮细胞经PTH刺激后呈不同程度的拉长,变为长梭形或不规则形,胞间连接变松散,Klotho mRNA和蛋白表达明显减少,E-cadherin mRNA表达减少,α-SMA mRNA表达增多,差异均有统计学意义(P<0.05),标志着肾小管上皮细胞向间充质细胞转化.而在法舒地尔的干预下,上皮细胞发生EMT的数量减少,E-cadherin mRNA表达增多,α-SMA mRNA表达减少,Klotho mRNA和蛋白表达均明显增强,差异均有统计学意义(P<0.05),其中法舒地尔在20μmol/L时抑制作用最显著.结论法舒地尔可以通过上调肾小管上皮细胞内Klotho表达,减轻PTH诱导的肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化,为法舒地尔在临床预防和治疗肾脏纤维化中的应用提供实验数据.