换一批摘要目的 构建稳定表达谷胱甘肽S转移酶mu5 (GSTMS)的人支气管上皮16HBE细胞株,探讨诱导GSTM5核转位的关键因素.方法 构建表达GSTM5基因的重组慢病毒载体(PLVX-puro-GSTM5-SBP-3*flag-N、PLVX-puro-3*flag-SBP-GSTM5-C)并制备出相应的慢病毒,感染人支气管上皮16HBE细胞后,经嘌呤霉素筛选获得细胞克隆;实时荧光定量PCR和蛋白印迹法(Western blot)分别检测细胞株中GSTM5的mRNA、蛋白表达水平;以肿瘤坏死因子-α (TNF-α;10 ng/ml)刺激稳定转染细胞株(稳转株)0.5 h,共聚焦荧光显微镜检测GSTM5核转位.结果 成功构建稳定表达GSTM5人支气管上皮细胞株(16HBE-GSTM5-SBP-3*flag-N、16HBE-3*flag-SBP-GSTM5-C);荧光共聚焦显微镜显示稳转株在TNF-αt刺激诱导后,GSTM5由胞浆转入胞核,以16HBE-GSTM5-SBP-3*flag-N稳转株更显著.结论 TNF-αt刺激可诱导GSTM5人支气管上皮细胞株中GSTM5发生核转位,可能与其N端含有非经典核定位信号密切相关.
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关键词
谷胱甘肽S转移酶mu 5重组慢病毒表达质粒16HBE核转位肿瘤坏死因子-αGlutathione S-transferase mu 5Recombinant lentiviral expression vector16HBENuclear translocationTumor necrosis factor-α
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DOI
10.7507/1671-6205.201611031
发布时间
2017-10-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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