换一批海洋源枯草芽孢杆菌2713抗白色念珠菌活性物质的鉴定
Identification of bioactive substances against Candida albicans by marine Bacillus subtilis 2713
摘要目的 探究海洋源枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)2713拮抗白色念珠菌(Candida albicans)的潜力,并分析其天然抗菌活性物质.方法 通过平板对峙、Spot-on-lawn及扫描电镜分析拮抗白色念珠菌潜力;通过基因测序及anti-SMASH在线分析有关抗菌活性物质基因簇;通过中试规模液体深层通气发酵验证该菌株合成抗菌活性物质的能力,借助大孔树脂吸附法分离抗菌活性物质,高效液相色谱法(HPLC)进一步纯化活性组分,然后对其稳定性进行表征;最后通过液相色谱质谱联用(LC-MC)确定抗菌活性物质的化学本质.结果 菌株2713能显著拮抗白色念珠菌,扫描电镜显示其会导致白色念珠菌细胞皱缩,甚至破坏其完整性.生物信息学分析表明菌株 2713 基因组中含有 fengycin、surfactin、bacilibactin、bacillaene、macrolactin、difficidin、bacilysin 等多种次生代谢产物合成簇.中试发酵证实菌株2713能合成拮抗白色念珠菌的生物活性物质.通过大孔树脂一步法分离提取发酵液中活性物质,回收率达到75％.粗提物经HPLC纯化得到活性组分.该纯化物能耐受30 min的100 ℃高温处理,并在pH 2～12条件下稳定;纯化物对胰蛋白酶和胃蛋白酶不敏感,但能被木瓜蛋白酶处理后失活.通过LC-MS分析证实拮抗白色念珠菌的纯化物质是由1条16个碳的脂肪酸链和1个10个氨基酸的环肽组成的C16-Fengycin A,其分子式为 C72H110N12O20.
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