换一批脆性X智力低下蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化
Expression and purification of human fragile X mental retardation protein in Escherichia coli
摘要目的:在大肠杆菌中对脆性X智力低下蛋白(FMRP)进行重组表达,获得高产量及高纯度的可溶性重组蛋白.方法:以人脑cDNA文库为模板,PCR扩增FMR1基因后将其克隆至融合表达载体pGEX - 6P -1中,重组载体转化进入大肠杆菌BL21(DE3) pLysS,并用IPTG进行诱导表达.应用谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B进行亲和层析纯化GST - FMRP融合蛋白,并以SDS - PAGE电泳和Western blot对融合蛋白的表达进行检测.结果:亲和纯化后的融合蛋白经FMRP及GST单抗分别进行Western blot鉴定为GST - FMRP融合蛋白.结论:大肠杆菌中FMRP ISO10的重组表达产量高,纯化得到可溶性重组蛋白,为FMRP抗体的制备及FXS检测试剂盒的开发奠定基础.
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