hOGG1基因高表达A549细胞株的构建及其对氧化应激的影响

The construction of A549 cell line with over expression of hOGG1 and effect on DNA damage and repair

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摘要目的构建人8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶(hOGG1)基因高表达细胞株,并初步探讨该细胞株对DNA氧化损伤与修复作用的影响.方法提取人血液淋巴细胞总RNA,设计hOGG1特异性引物,RT-PCR扩增后构建pcDNA3.1(+)/Myc-His A/hOGG1载体.经EcoRI和KpnI酶切,凝胶电泳及DNA测序证实建立成功后,稳定转染A549细胞,Western blot法检测转染阳性细胞hOGG1蛋白表达的改变.以构建的hOGG1基因高表达细胞株为研究对象,H2O2为受试物,彗星试验检测比较各组细胞对抗损伤和修复能力的情况.结果成功构建pcDNA3.1(+)/Myc-His A/hOGG1质粒并转染目的细胞,Western blot法检测转染靶细胞中hOGG1蛋白表达比空白组和阴性对照组明显增加(P<0.05).相同H2O2浓度下,转染细胞彗星细胞率和Olive Tail Moment明显低于空白组和阴性对照组,且修复完成率高,修复时间缩短(P<0.05),提示细胞对抗DNA损伤和修复能力均显著增高P<0.05).结论 hOGG1基因的高表达可确切减轻细胞氧化损伤敏感性并提升DNA的修复能力.hOGG1基因高表达细胞株的成功构建,为基因水平的靶向治疗研究提供了一种有效手段.