换一批
换一批新城疫病毒HN基因的截短表达及间接ELISA抗体检测方法的建立与应用
Development and Application of Indirect ELISA for Detecting Antibodies Against Newcastle Disease Virus with Recombinant Truncated HN Protein Expressed in E.coli
摘要为建立一种快速的新城疫病毒(NDV)抗体检测方法,参照已发表的NDV基因组序列,设计合成1对特异性引物,PCR扩增了长约1 044 bp的HN基因片段.将目的片段定向克隆到pGEX-6p-1原核表达载体,酶切及测序鉴定均正确后,转化BL21表达菌,经IPTG诱导得到了以包涵体形式表达的重组蛋白.重组蛋白纯化后,经免疫印迹检测证明具有良好的抗原性和特异性.以该蛋白作为诊断抗原,建立了检测新城疫病毒抗体的间接ELISA诊断方法.该方法批内重复性试验的变异系数小于5％,批间重复性试验的变异系数小于10％；与血凝抑制试验(HI)相比较,符合率、敏感性和特异性分别为92.0％、91.0％和93.6％.
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