不同微泡浓度对NT-3基因转染神经干细胞的影响

Impact of different microbubbles concentration on transfection efficiency of NT-3 gene into neural stem cell

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摘要目的探讨低频超声下体外介导神经营养因子3(NT-3)基因转染神经干细胞的适宜超声微泡浓度.方法体外培养神经干细胞,在24孔板中加入200μl不同浓度(分别为10％、20％和30％)微泡和20μl pEGFP-NT-3基因重组质粒(1 μg/μl)混合静置30 min.将500 μl神经干细胞悬液(3×105/ml)加入微泡和质粒混合液中,固定声强1.5 W/cm2,照射时间60 s,占空比10％,用1 MHz超声探头辐照.转染后流式细胞仪检测细胞绿色荧光蛋白表达情况,MTT法检测神经干细胞存活率.空白对照组为质粒与神经干细胞的混合物,不经超声辐照.结果微泡浓度为10％时,细胞存活率＞80.00％,但细胞转染率只有(6.26±0.58)％;微泡浓度为30％时,细胞存活率＜40.00％,同时转染率最低;而当微泡浓度为20％时,细胞存活率较高[(69.66±2.08)％],且细胞转染率最高[(14.39±1.79)％].结论在一定超声辐照参数条件下,微泡浓度20％的细胞转染率较高,且对细胞损伤较小,可作为神经干细胞基因转染的适宜条件.