换一批人类乳头瘤病毒16型E7C亚基因在耻垢分枝杆菌中的表达
Expression of the Human papillomavirous type16 E7C subgene in Mycobaterium smegmatis mc2155
摘要目的 在耻垢分枝杆菌Mycobaterium smegmatis mc2155中表达人类乳头瘤病毒16型E7C亚基因,为其重组BCG疫苗的研究奠定基础.方法 采用电穿孔转化法将重组质粒pBCG-E7C导入耻垢分枝杆菌(M. smegmatis mc2155)中,通过卡那霉素抗性筛选经PCR鉴定的重组M. smegmatis mc2155,培养于middlebrook7H9 broth(M7H9)培养基中,并添加10%M7H9 enrichment ADC和0.05%Tween 80,37 ℃培养48 h～72 h,42 ℃诱导表达5 h,表达产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western blot分析.结果 成功构建pBCG3000-E7C质粒,SDS-PAGE显示表达产物的分子质量单位约为6.5 ku,与预期理论值相符,Western blot分析表达产物能被宫颈癌患者血清识别.结论人类乳头瘤病毒16型E7C基因在M. smegmatis mc2155中成功表达.
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