换一批
换一批弓形虫SAG2基因在毕赤酵母中的表达及免疫原性研究
Expression and immunogenicity of the SAG2 gene of Toxoplasma gondii in Pichia pastoris
摘要目的 在毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统中表达弓形虫SAG2基因,探索一种新的有效活化机体抗弓形虫免疫反应的疫苗.方法 以重组质粒pET23a-SAG2为模板,亚克隆目的 片段SAG2至酵母菌分泌表达载体pPICZαA,重组质粒经线性化后电转化转染至毕赤酵母菌GS115菌株,经抗生素Zeocin筛选得到高拷贝转化子.经甲醇诱导表达,取细胞裂解上清进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blot)分析.以整体重组酵母菌作为疫苗腹腔免疫BALB/c小鼠,检测小鼠的免疫反应. 结果 成功构建了pPICZαA-SAG2毕赤酵母表达重组质粒.经甲醇诱导,在酵母细胞内表达分子质量单位为22 ku的蛋白.Western blot显示,22 ku蛋白可被抗-His标签抗体识别. 结论 在毕赤酵母菌中成功表达了SAG2基因.整体重组酵母活菌具有免疫原性.
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