换一批霍乱弧菌分子分型和溯源技术ISSR-PCR的改进
Technical improvement of ISSR-PCR to genotype and genetically trace Vibrio cholerae
摘要目的 对简单序列重复区间聚合酶链反应(ISSR-PCR)进行改进和优化,以建立一种改进型霍乱弧菌分子分型和遗传溯源技术. 方法 通过设计、筛选优良扩增引物和优化反应体系对ISSR-PCR进行技术改进,并选择75株霍乱弧菌作为方法学的分型测试样品进行实验验证. 结果 经筛选以引物ISSR_GA5分型效果最佳.对ISSR-PCR实验条件进行优化,确定最佳反应体系:Mg2+浓度为2.0 mmol/L,dNTPs浓度为0.3 mmol/L、引物浓度为1.2 μmol/L.采用改进型ISSR-PCR技术能正确区分霍乱弧菌菌株中的产毒株(流行株)和非产毒株(非流行株)、O1群/O139群和非O1/非O139群以及本地株和外地株. 结论 建立的改进型ISSR-PCR技术分型效率高,为我国卫生检疫和疾控部门开展霍乱等重要传染病的防控和疫情溯源提供了新的、简便实用的技术方法.
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关键词
霍乱弧菌简单序列重复区间聚合酶链反应分子分型遗传溯源Vibrio cholerae inter-simple sequence repeat-polymerase chain reaction (ISSR-PCR) molecular typinggenetic tracing
医学主题词
霍乱弧菌(Vibrio cholerae)分子分类(Molecular Typing)聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction)遗传(Heredity)方法(Methods)
栏目名称
DOI
10.13350/j.cjpb.140907
发布时间
2014-11-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家质检总局科技计划项目（No.2009IK206）
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