换一批
换一批结核分枝杆菌早期分泌靶抗原和抗原85B融合蛋白的原核表达及其在血清学检测中的初步应用
Use of early secretory antigenic target protein and antigen 85B fusion protein of Mycobacterium tuberculosis in serological testing
摘要目的 原核表达结核分枝杆菌抗原早期分泌抗原靶6 ku蛋白和抗原85B融合蛋白,建立融合抗原对结核病人快速诊断方法. 方法 从结核分枝杆菌H37Rv基因组中PCR扩增ag85B和Rv3875基因并构建表达载体pGEX4T-1上,转化BL21经IPTG诱导表达GST-85B-ESTA-6融合蛋白,对包涵体进行变性和透析复性后进行GST亲和层析纯化,纯化的可溶性目的蛋白用聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot进行鉴定;以融合蛋白为抗原,采用ELISA检测结核病人血清抗体. 结果 成功构建了结核分枝杆菌ag85B和Rv3875融合基因原核表达载体,转化大肠埃希菌BL21后经诱导产生了高水平的GST-85B-ESTA-6,该蛋白存在于菌体沉淀中,以包涵体形式居多.包涵体经变性、复性后用GST亲和层析纯化,纯化蛋白仍能与结核病患者血清反应,即可用于病人血清抗体检测. 结论 成功构建了pGEX4T-1-ag85B-Rv3875重组质粒,并诱导表达了含有GST-标签的ESAT-6-85B融合蛋白,为进一步研究结核菌的免疫机制奠定了基础.
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关键词
结核分枝杆菌早期分泌抗原靶6 ku蛋白抗原85原核表达Mycobacterium tuberculosis6-ku early secretory antigenic target protein (ESAT-6)antigen 85B proteinprokaryotic expression
分类号
R378.911
栏目名称
DOI
10.13350/j.cjpb.150502
发布时间
2015-07-31
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