换一批2型猪链球菌细胞分裂蛋白DivIVA的原核表达及纯化
Prokaryotic expression of the DivIVA protein from Streptococcus suis serotype 2
摘要目的 利用原核表达系统制备2型猪链球菌细胞分裂起始因子DivIVA重组蛋白并进行纯化,为研究其在调控细胞分裂中的作用奠定基础. 方法 以2型猪链球菌05ZYH33全基因组为模板,PCR扩增divIVA基因片段,经BamH Ⅰ和Xhol Ⅰ双酶切后将目的片段连接至表达载体pET28a,构建重组表达质粒pET28a-divIVA,经测序鉴定后将重组质粒转化进入表达菌E.coli BL21,以终浓度为0.1 mmol/L的IPTG于37℃培养4h,诱导DivIVA蛋白表达.用Ni离子亲和层析柱分离纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot进行检测和验证. 结果 成功构建重组表达质粒pET28a-divIVA,并在E.coli BL21中表达主要以包涵体形式存在的DivIVA蛋白.包涵体蛋白经8 mol/L脲变性溶解后经Ni离子亲和层析柱纯化,获得的目的蛋白经SDS-PAGE检测分子质量为36 ku,与预期大小相符;经Western blot检测,该蛋白能被相应抗体特异性识别. 结论 在E.coli BL21中成功表达并纯化了DivIVA蛋白,为研究该蛋白在2型猪链球菌的细胞分裂机制奠定了基础.
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关键词
2型猪链球菌DivIVA蛋白蛋白原核表达Streptococcus suis 2cell division factor DivIVAprokaryotic protein expression
栏目名称
DOI
10.13350/j.cjpb.160605
发布时间
2016-09-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（No.81571965）
国家自然科学基金（No.81172794）
国家自然科学基金（No.81071317）
国家自然科学基金（No.81471920）
江苏省自然科学基金（No.BK20151091）
江苏省高层次人才培养工程"项目（BRA2014363）
南京军区医学科技创新项目（No.ZX39）
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