换一批细粒棘球绦虫胰岛素受体蛋白原核表达及其多克隆抗体制备
Expression of the insulin receptor protein of Echinococcus granulosus and preparation of polyclonal antibodies
摘要目的 制备细粒棘球绦虫胰岛素受体(EgIR)蛋白的多克隆抗体,为进一步研究EgIR蛋白的功能提供检测抗体.方法 利用Gamier-Robson、Chou-Fasman、DNAMAN等软件预测EgIR蛋白抗原表位,进行引物序列设计.将预测的EgIR基因部分序列克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,转化E.coli ROSETTA(DE3)株,IPTG诱导蛋白表达,表达产物EgIR蛋白经谷胱甘肽琼脂糖柱纯化后注射免疫家兔10 d,收集免疫血清,采用ELISA法测定抗体效价,采用Western blot检测制备的多克隆抗体与EgIR蛋白的结合特性.结果 构建的原核表达载体转化DE3后经0.8mmol/L IPTG诱导,成功表达约55 ku的EgIR重组蛋白;目的蛋白纯化后的浓度为3 mg/ml,纯度为85％;免疫家兔后收集的血清经ELISA法检测,抗体效价＞1∶51 200;Western blot检测该抗体能与10、5、1 ng/ml的EgIR重组蛋白特异结合,该抗体1∶1 000稀释后仍可检测到原头蚴、囊泡蛋白样品中的胰岛素受体蛋白.结论 成功制备兔抗EgIR亚基多克隆抗体,为EgIR蛋白的功能和药物靶标研究奠定了基础.
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分类号
R383.3（医学寄生虫学）
栏目名称
DOI
10.13350/j.cjpb.170211
发布时间
2017-04-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（81560607、U1303222、81360251）
新疆重大疾病医学重点实验室开放基金（SKLIB-XJMDR-2012-2）
新疆包虫病基础医学重点实验室开放基金（XJDX0202-2013-10）
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