换一批荧光蛋白标记逆转录病毒整合酶及Brd2真核表达载体的构建
Construction of retrovirus integrase eukaryotic expression vectors and interaction of integrase with Brd2
摘要目的 构建绿色荧光蛋白标记的莫洛尼鼠白血病病毒 (MLV) 和人类免疫缺陷病毒 (HIV) 整合酶及红色荧光蛋白标记的Brd2的真核表达质粒, 为研究整合酶与Brd2相互作用打下基础.方法以Prr88-MLV、HIV质粒pNL4-3及含有Brd2的质粒为模板, 采用PCR技术扩增MLV-IN、HIV-IN、Brd2片段;利用酶切反应体系构建psectag2A-GFP-mIN、psectag2A-GFP-hIN、pDsred2-N1-Brd2质粒, 0.8％琼脂糖凝胶电泳后进行测序分析;用重组质粒转染293T细胞, 荧光显微镜观察目的蛋白表达情况, 并进行WB鉴定.结果 构建psectag2A-GFP-hIN、psectag2AGFP-mIN、pDsred2-N1-Brd2的真核表达质粒, 酶切以及测序结果与预期相符.将上述质粒分别转染293T细胞, WB及荧光显微镜均检测到目的蛋白的表达.结论 成功构建了绿色荧光标记的HIV、MLV整合酶真核表达质粒和红色荧光蛋白标记的Brd2真核表达质粒, 尽管Brd2真核表达质粒荧光相对较弱, 但这对整合酶与Brd2相互作用研究奠定了基础.
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关键词
莫洛尼鼠白血病病毒人类免疫缺陷病毒整合酶溴结合蛋白 (Brd2)荧光蛋白Moloney murine leukemia virus (MLV)human immunodeficiency virus (HIV)integraseBrd2fluorescence labeling protein
栏目名称
DOI
10.13350/j.cjpb.180705
发布时间
2018-10-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（No.WJ2017M049）
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