换一批表达SARS-CoV-2的RBD基因及多表位基因重组DNA候选疫苗的构建及小鼠免疫效果评价
Construction of RBD vaccine and multi-epitope gene recombinant DNA vaccine candidate expressing SARS-CoV-2 and mouse immunization evaluation
摘要目的 构建针对新型冠状病毒的重组核酸苗,评价其与佐剂联合免疫BALB/c小鼠的效果.方法 选择新型冠状病毒S蛋白的受体结合域蛋白基因(RBD)和新冠病毒S、M、N、E 4个结构蛋白的抗原表位基因(EPI)为主要抗原基因,以pVAX1为载体,分别构建pVAX-RBD-EPI质粒和pVAX-RBD质粒.用2种重组质粒和pVAX空载体质粒分别与PIKCA佐剂联合免疫或无佐剂免疫BALB/c小鼠,共免疫3次,间隔21天免疫,每7 d对小鼠特异性抗体进行检测;对三免后21 d小鼠脾淋巴细胞进行T淋巴细胞亚类检测.结果 成功构建了重组质粒pVAX-RBD-EPI和pVAX-RBD.用重组质粒转染BHK细胞,Western blot显示重组核酸质粒稳定表达目的蛋白.BALB/c小鼠免疫结果表明,三免后14d时pVAX-RBD-EPI+PIKCA组IgG抗体水平为无佐剂组的3.65倍(P＜0.01).三免后21 d,pVAX-RBD-EPI+PIKCA 组 CD3+/CD4+T 达到55.71％,是阴性对照组的 1.52倍(P＜0.01);三免后21 d,CD3+/CD8+T 数量 pVAX-RBD-EPI+PIKCA组为7.07％,是阴性对照组的 1.83倍,是 pVAX-RBD-EPI 组(5.86％)的 1.2倍(P＜0.05).结论 成功构建重组DNA候选疫苗pVAX-RBD-EPI和pVAX-RBD-EPI.两种疫苗均具有良好的免疫原性,其中PIKCA免疫佐剂的加入可增强小鼠细胞免疫和体液免疫水平.
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DOI
10.13350/j.cjpb.220101
发布时间
2022-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
吉林省重点研发计划项目（No.20200901001SF）
长春市发展计划项目（No.2020RW001）
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