换一批2型猪链球菌酪氨酸激酶Cps2C基因过表达株的构建
Construction of Tyrosine Kinase Cps2C Overexpression Strain in Streptococcus suis serotype 2
摘要目的 构建2型猪链球菌酪氨酸激酶Cps2C基因过表达株,为cps2C基因功能研究提供实验材料.方法 使用重叠延伸PCR技术将延伸因子TufA(又名EF-Tu,编码基因为SSU05_0530)的启动子(命名为P0530)与cps2C基因连接为P0530cps2C片段,将P0530cps2C酶切后连接至猪链球菌-大肠埃希菌穿梭质粒pSET2,构建过表达质粒pSET2∷P0530cps2C.将pSET2∷P0530cps2C电转化导入S.suis 2野生毒株05ZYH33感受态细胞,抗性及组合PCR筛选得到cps2C过表达株.qRT-PCR检测过表达株cps2C基因的转录水平.结果 重叠延伸PCR成功将P0530启动子片段(300 bp)和cps2C基因片段(696 bp)拼接为P0530cps2C(996 bp),片段及载体经BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切后连接,成功构建出过表达质粒pSET2∷P0530cps2C;将pSET2∷P0530cps2C电转化导入S.suis 2 05ZYH33感受态细胞,抗性筛选及组合PCR检测结果显示cps2C过表达株构建成功.提取野生株05ZYH33和cps2C过表达株总RNA后进行qRT-PCR实验,结果显示过表达株cps2C基因的相对表达水平较05ZYH33株上调2.4倍.结论 本研究选用S.suis2 05ZYH33的延伸因子TufA强启动子P0530作为启动子,成功构建过表达质粒pSET2∷P0530cps2C并导入S.suis 2感受态细胞,成功获得cps2C过表达株,为进一步研究酪氨酸激酶Cps2C功能提供实验材料.
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DOI
10.13350/j.cjpb.220706
发布时间
2022-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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