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呼吸道合胞病毒mRNA候选疫苗的表达、鉴定及免疫效果验证

Expression,identification and immune efficacy verification of respiratory syncytial virus mRNA vaccine candidate

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摘要目的制备呼吸道合胞病毒F蛋白的融合前构象(pre-F)mRNA疫苗,进行可行性验证.方法对抗原基因进行密码子优化设计,分别连接至pGEM-3Zf-N3载体上,通过质粒线性化、体外转录、纯化和Cap1加帽处理,得到功能性mRNAs.在转染至293T细胞后,利用Western blot和间接免疫荧光试(IFA)来确定目标蛋白的表达情况.通过微流控装置制备LNP/mRNAs疫苗免疫C57BL/6小鼠,检测小鼠血清中抗原特异性IgG抗体效价,评估免疫效果.结果成功构建重组质粒Pre-F-GCN4t和mDS-Cav1,通过双酶切验证条带符合预期大小.表达目的抗原大小为57.57 ku和64.35 ku.成功检测小鼠血清中抗原特异性IgG抗体,Pre-F-GCN4t免疫组的效果优于mDS-Cav1组,3次免疫较2次免疫提升了 2倍,抗体效价最高可达1∶4×104.结论两种抗原设计模式均具有可行性,Pre-F-GCN4t的设计方式对于激活机体的体液免疫应答更有优势,mRNA疫苗无需体内转录,为呼吸道合胞病毒mRNA疫苗的优化设计提供理论基础.

作者姜人月 ^[1] 庄忻雨 ^[2] 田明尧 ^[2] 唐家凤 ^[3] 狄亚心 ^[4] 杨松惠 ^[2] 许智强 ^[1] 于潼 ^[5] 张桐 ^[6] 金鑫 ^[7] 金宁一 ^[2] 学术成果认领

作者单位延边大学农学院,吉林延吉 133002;中国农业科学院长春兽医研究所 ^[1] 中国农业科学院长春兽医研究所 ^[2] 中国农业科学院长春兽医研究所;广西大学动物科学技术学院 ^[3] 中国农业科学院长春兽医研究所;东北农业大学动物医学学院 ^[4] 中国农业科学院长春兽医研究所;吉林农业大学动物医学学院 ^[5] 中国农业科学院长春兽医研究所;吉林大学动物医学学院 ^[6] 延边大学农学院,吉林延吉 133002 ^[7]

关键词呼吸道合胞病毒 mRNA疫苗密码子优化体液免疫 respiratory syncytial virus mRNA vaccine codon optimization humoral immunity

栏目名称

论著

DOI 10.13350/j.cjpb.240501

发布时间 2024-05-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

基金项目

国家自然科学基金（No.32202820）国家重点研发计划（No.21ZGY30）