换一批狂犬病病毒VHH抗体库的构建、表达及鉴定
Construction,expression and characterisation of VHH antibody library antibodies against rabies virus
摘要目的 筛选抗狂犬病病毒特异性纳米抗体,为其作为免疫治疗制剂提供基础.方法 采集免疫羊驼后的外周血,分离单个核细胞,利用巢式PCR扩增VHH基因.通过噬菌体展示技术构建狂犬病病毒纳米抗体展示文库,通过phage ELISA特异性筛选具有高亲和力和特异性的抗RABV纳米抗体序列.将获得的抗体序列插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建真核重组表达质粒pcDNA3.1(+)-VHH,以脂质体作为转染试剂,瞬时转染高密度的HEK293T细胞中进行表达.表达的抗体经镍柱纯化后分别通过Western blot和病毒中和实验验证其活性.结果 成功构建了库容量为3.3×106cfu/mL的狂犬病病毒纳米抗体文库,文库多样性良好.筛选获得了 4株具有高亲和力和特异性的抗RABV纳米抗体序列.表达纯化的2株重组纳米抗体均显示对RABV的中和活性,中和效价分别为0.817 IU/mL和1.14 IU/mL.结论 本研究成功构建了针对RABV的纳米抗体文库,并在细胞中成功表达了特异性的纳米抗体.
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栏目名称
DOI
10.13350/j.cjpb.250702
发布时间
2025-06-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
吉林省科技发展计划项目（No.20210202052NC）
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