摘要克隆家蝇抗真菌肽-1 (MAF-1)的cDNA序列并对其编码的蛋白序列进行生物信息学分析.方法 根据MAF-1的N端30个氨基酸序列设计简并引物,采用RACE法和巢式PCR技术克隆MAF-1的3＇端和-5＇端cDNA序列,获得MAF-1的cDNA序列和氨基酸序列.根据所得MAF-1成熟肽部分的cDNA序列设计引物进行RT-PCR,对序列进行验证并运用生物信息学软件进行分析.结果 MAF-1的3＇端cDNA序列长度为568 bp,开放阅读框长度为441 bp,编码蛋白序列共147个氨基酸,3＇端非编码区127 bp.经NCBI中Blast比对未找到同源序列,提示该基因为一全新序列,登录到G enBank,获得登录号HM178948.该基因编码的147个氨基酸加上MAF-1的N端未用来设计引物的9个氨基酸,全长共156个氨基酸.由5'RACE获得139 bp cDNA序列,分析所得MAF-1成熟肽的氨基酸序列与前述一致.RT-PCR结果证实了RACE所得MAF-1序列的正确性.根据生物信息学分析方法对所推导的MAF-1蛋白全长序列进行分析,其理论相对分子质量和等电点均与其实际检测值相近.利用ExPASy的各种分析工具对MAF-1分析得知,该蛋白具有信号肽,富含α螺旋,有3个α螺旋区,亚细胞定位分析其主要分布于细胞核内.利用PredictProtein分析发现,MAF-1序列中有2个蛋白激酶C磷酸化位点、1个N端酰基化位点,并预测MAF-1为非球形蛋白.最后,利用ExPASy中的3D-pssm (Phyre Version0.2)模建了MAF-1的三维空间结构图.结论成功克隆了家蝇抗真菌肽-1(MAF-1)的cDNA序列,获知其编码的氨基酸序列和生物信息学信息.