肝片形吸虫重组组织蛋白酶L的免疫反应性和免疫原性分析

Immunoreactivity and Immunogenicity Analysis of the Recombinant Cathepsin L-like Protease of Fasciola hepatica in SD Rats

摘要目的分析肝片形吸虫(Fasciola hepatica)重组组织蛋白酶L(CatL)的免疫反应性,以及对SD大鼠的免疫原性. 方法诱导含重组原核表达质粒pET30a-FhCatL的大肠埃希菌BL21 (DE3)宿主菌表达,SDS-PAGE分析表达产物,以感染肝片形吸虫山羊血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫反应性.20只SD大鼠随机均分为重组蛋白免疫组和佐剂对照组,免疫组大鼠皮下注射纯化的重组FhCatL,200μg/(只·次),共免疫3次,每次间隔3周;对照组用等量PBS与佐剂混合后注射.于第2次和末次免疫前,以及末次免疫后3、6和9周尾静脉采血,分离血清.利用间接ELISA法检测免疫大鼠血清IgG抗体水平,噻唑蓝比色法(MTT法)检测脾淋巴细胞增殖情况.结果经纯化获得重组FhCatL蛋白,相对分子质量(Mr)约42 000.Western blotting分析结果表明,纯化重组蛋白能被感染肝片形吸虫的山羊血清识别.重组FhCatL蛋白免疫SD大鼠后可诱导产生特异性IgG抗体,随着免疫时间的延长抗体水平逐渐升高,于末次免疫后3周抗体效价达到峰值(1∶102400),明显高于对照组(1∶1 000).免疫组脾淋巴细胞刺激指数为2.176±0.047,显著高于对照组(1.171±0.032)(P＜0.05). 结论重组FhCatL蛋白具有较好的免疫反应性和免疫原性.