摘要目的 分析云南中缅边境地区恶性疟原虫抗叶酸类药物磺胺多辛-乙胺嘧啶抗性基因的多态性和抗性回复突变趋势.方法 收集2010-2018年中缅边境恶性疟病例滤纸血样品,巢式PCR扩增恶性疟原虫二氢叶酸还原酶(pfdhfr)基因和恶性疟原虫二氢蝶酸合酶(pfdhps)基因,采用Geneious Prime软件比对测序结果,Microsoft Excel 2016和GraphPad prism 8.0.2软件分析突变频率和单体型分布差异,卡方检验分析抗性相关基因位点单核苷酸多态性特征和不同年份单体型分布差异,Haploview软件分析pfdhfr和pfdhps基因连锁不平衡情况.结果 共收集中缅边境地区190份恶性疟样品,PCR扩增出pfdhfr180份、pfdhps 178份.测序结果显示,pfdhfr和pfdhps均出现等位基因的多重感染,其中pfdhfr检出17个多重感染,突变位点分别位于第51、59、108、164位氨基酸密码子,其表型为511/59R/108N/164L;pfdhps检出4个多重感染,突变位点分别位于第436、437、540、581位氨基酸密码子,其表型为436A/437A/540E\N/581G("\"表示并列关系).pfdhfr第N51I、C59R、S108N、I164L位点的突变率分别为 57.8％(108/187)、90.1％(172/191)、93.3％(168/180)、59.6％(109/183);pfdhps第 S436A\C、A437G、K540E\N、A581G 位点抗性突变率分别为 54.7％(99/181)、86.5％(154/178)、84.9％(152/177)、28.7％(51/178).pfdhfr单体型主要集中在三点、四点突变型(51I59R108N/59R108N164L、51I59R108N164L),分别占44.9％(84/187)和36.9％(69/187).pfdhfr和pfdhps野生型在2010年均未检出.2011年的pfdhfr三点、四点突变单体型(同上)分布频率分别为 35.9％(23/64)、37.5％(24/64),均小于 2010 年的 46.2％(30/65)、49.23％(32/65)(P＜0.05),与 2014-2018 年的 53.4％(32/58)、22.4％(13/58)比较差异有统计学意义(P＜0.05).2014-2018年的pfdhps三点突变单体型(436A\C437G540E\N,437G540E\N581G)分布频率为62.1％(36/58),小于2010年的82.3％(51/62)和2011年的78.7％(48/61)(均P＜0.05).连锁不平衡分析显示,pfdhfr C59R与S108N基因关联性强(D'=1,r2=0.8),pfdhps S436A 与 A581G 关联性强(D'=1,r2=0.6),且 S108N 与 K540E 存在较强关联性(D'=0.8,r2=0.2).结论 云南中缅边境恶性疟原虫pfdhfr和pfdhps基因的抗性分子突变单体型仍是优势基因,且随着停药时间延长突变频率逐渐降低.