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多房棘球蚴感染小鼠腹膜腔免疫细胞迁移及其功能变化

Immune cell migration and its functional changes in the peritoneal cavity of mice infected with Echinococcus multilocular

摘要目的 了解多房棘球蚴感染小鼠腹膜腔免疫细胞迁移及分化的变化,探讨其发挥免疫功能的机制.方法 裂解增强绿色荧光蛋白(EGFP)小鼠脾组织,分离EGFP示踪免疫细胞.C57BL/6J小鼠腹腔注射2.5 × 107个示踪免疫细胞,5 d后经肝门静脉穿刺接种3 000个多房棘球蚴原头节.感染19周后,取感染小鼠肝、脾组织,冷冻切片后4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色,免疫荧光观察示踪免疫细胞的分布.分离感染小鼠外周血、肝、脾和腹膜腔免疫细胞,流式细胞术检测EGFP示踪免疫细胞在不同组织的迁移分布和细胞分型,以及细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素4(IL-4)的分泌情况.结果 免疫荧光结果显示,EGFP示踪细胞主要迁移至小鼠脾组织.肝组织中各型示踪淋巴细胞占比从高到低依次为CD8+T细胞(79.63±5.00)%、CD4+T 细胞(7.08±4.00)%、B 细胞(2.01±1.00)%(F=396.20,P<0.01);脾组织中各型淋巴细胞占比从高到低依次为CD8+T细胞(73.97±3.56)%、CD4+T细胞(11.92±5.02)%、B细胞(3.86±0.32)%(F=349.00,P<0.01);腹膜腔中各型淋巴细胞占比从高到低依次为CD8+T细胞(45.27±4.53)%、CD4+T 细胞(34.60±8.00)%、B 细胞(15.03±6.38)%(F=16.90,P<0.05).肝、脾、腹膜腔中的示踪 CD4+T细胞数量分别为 2 700±3 120、14407±11 958、3 376±1 481,示踪 CD8+T 细胞数量分别为 26 407±22 190、109179±92 692、4 245±798,示踪B细胞数量分别为698±719、5 794±4 971、1 476±840,3种示踪淋巴细胞均主要分布在脾组织中(F=2.51、3.03、2.62,均P>0.05).肝组织中各型髓系细胞占比从高到低依次为树突状细胞(3.94±1.33)%、单核细胞(3.79±1.80)%、巨噬细胞(3.13±1.85)%、嗜酸粒细胞(2.40±1.81)%、骨髓来源抑制性细胞(0.76±0.17)%、中性粒细胞(0.67±0.04)%(F=3.21,P<0.05);脾组织中各型髓系细胞占比从高到低依次为树突状细胞(1.86±0.89)%、单核细胞(0.41±0.09)%、巨噬细胞(0.23±0.03)%、中性粒细胞和骨髓来源抑制性细胞[均(0.13±0.14)%]、嗜酸粒细胞(0.04±0.04)%(F=42.70,P<0.01);外周血中组织中各型髓系细胞占比从高到低依次为树突状细胞(0.37±0.28)%、单核细胞(0.22±0.27)%、巨噬细胞(0.22±0.21)%、中性粒细胞和骨髓来源抑制性细胞[均(0.17±0.08)%]、嗜酸粒细胞(0.05±0.08)%(F=0.92,P>0.05).肝组织的示踪CD4+T细胞中,分泌IFN-γ、TNF-α、IL-4的细胞分别占(41.17±19.92)%、(30.70±3.35)%、(2.78±4.81)%(F=8.22,P<0.05);示踪 CD8+T 细胞中,分泌 IFN-γ、TNF-α、IL-4 的细胞分别占(64.17±3.17)%、(24.85±15.66)%、(5.67±6.35)%(F=27.08,P<0.01).脾组织的示踪 CD4+T 细胞中,分泌 IFN-γ、TNF-α、IL-4 的细胞分别占(52.43±19.43)%、(27.67±18.99)%、(4.77±2.23)%(F=6.88,P<0.05);示踪 CD8+T 细胞中,分泌 TNF-α、IFN-γ、IL-4 的细胞分别占(40.53±17.79)%、(38.97±18.04)%、(3.23±3.09)%(F=6.15,P<0.05).腹膜腔的示踪CD4+T细胞中,分泌IFN-γ、TNF-α、IL-4的细胞分别占(64.33±6.82)%、(46.43±13.44)%、(4.03±3.51)%(F=36.04,P<0.01);示踪 CD8+T 细胞中,分泌 IFN-γ、TNF-α、IL-4 的细胞分别占(53.57±19.17)%、(21.47±8.54)%、(6.13±8.63)%(F=10.24,P<0.05).结论 多房棘球蚴感染小鼠腹膜腔内免疫细胞主要迁移至脾组织,细胞类型以CD8+T细胞和树突状细胞为主.T细胞主要分泌IFN-γ,呈Th1型免疫应答.

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