摘要目的 了解间日疟原虫VIR14蛋白与细胞间黏附分子-1(ICAM-1)受体的结合情况并分析其关键位点.方法 将重组质粒pET28a-VIR14转化至大肠埃希菌BL21(DE3),经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质免疫印迹(Western blotting)分析间日疟原虫重组VIR14蛋白的表达情况与纯度.通过表面等离子共振(SPR)技术验证VIR14蛋白或多肽与ICAM-1受体的结合情况.预测VIR14以及ICAM-1(28～480 aa)蛋白的结构,综合预测复合物建模分数(pTM)及局部距离差异测试分数(pLDDT),通过cluspro 2.0对接分析得分最高的VIR14和ICAM-1模型之间的相互作用.使用PDBePISA系统和pymol 3.0软件处理对接结果,分析对接位点.通过全球不同流行区数据分析结合位点氨基酸多态性.结合表位竞争抑制实验分析受体与配体相互作用的关键位点.结果 SDS-PAGE结果显示,成功表达并纯化相对分子质量(Mr)约为58 000的VIR14蛋白.SPR实验表明,不同浓度的VIR14蛋白与ICAM-1受体结合响应值呈浓度依赖上升,亲和力值为15.16 μmol/L.Alphafold2结构预测结果显示,VIR14蛋白最佳模型pLDDT和pTM评分分别为78.2和0.73;ICAM-1受体最佳模型pLDDT和pTM值分别为93.8和0.65.VIR14与ICAM-1蛋白之间形成极性键的区域集中在蛋白尾端(212～406 aa).在含有预测结合位点的2条多肽中,仅P2多肽与ICAM-1结合,亲和力为48.99 μmol/L.竞争抑制实验表明,P2多肽能抑制VIR14蛋白与ICAM-1结合.将P2中的4个关键位点(ASP-310、ARG-314、LYS-316、ASP-318)突变为丙氨酸以改变它们的侧链后,P2丧失了抑制能力.P2多肽在全球338个地理株中高度保守.结论 间日疟原虫VIR14蛋白能与ICAM-1受体紧密结合,4个关键氨基酸位点发挥了重要作用,且在全球种群中具有高度保守性.