广西壮族腰椎间盘突出症血瘀证的血清蛋白质组学研究

Serum proteomics study for blood stasis syndrome of lumbar intervertebral disc protrusion in Guangxi Zhuang population

摘要[目的]筛选壮族患者腰椎间盘突出症(lumbar intervertebral disk protrusion,LIDP)血瘀证的血清生物标志蛋白,从蛋白质组学角度探讨腰椎间盘突出症血瘀证的发生机制及辨证规律,丰富LIDP中医症候学的内涵;为下一步研究、构建壮族LIDP血瘀证的血清诊断模型及应用生物标志物进行辨证及寻找靶标中草药治疗本病打下基础.[方法]根据样本匹配原则收集110例纳入对象,包括壮族LIDP血瘀证患者(ZX) 30例、汉族LIDP血瘀证患者(HX) 20例、壮族LIDP非血瘀证患者(ZF) 20例、汉族LIDP非血瘀证患者(HF) 20例及壮族健康者(ZJ) 10例、汉族健康者(HJ) 10例.按照相同方法提取110例样本外周血的血清样本,应用表面增强激光解吸/电离飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption/inionation time of flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术筛选广西壮族LIDP血瘀证的差异表达蛋白,并采用高效液相色谱串联电喷雾离子阱质谱(high performence 1 iquid chromatography-electrospray ionization mass spectrometry,HPLC-ESI-MS/MS)技术对部分差异性蛋白进行液质联用串联质谱分析,随后利用BiomarkWizard Software分析数据、查阅文献及检索蛋白质数据库,识别壮族LIDP血瘀证的血清标志蛋白质.采取相似性序列分析、特殊位点和区域的识别、二级结构预测及蛋白质功能预测等生物信息学方法获取相关蛋白质氨基酸序列、基因组定位和序列等信息.[结果]在相对分子质量1 000 ～50 000 Da范围内共检测到172个蛋白峰,其中22个蛋白峰有统计学意义(P＜0.05).对22个差异蛋白中的2个蛋白进行LC-MS/MS液质联用串联质谱分析显示m/z 5 229.41为MYOF Isoform 1 of Myoferlin,m/z 7 604.40为RAPGEF5 Isoform 2 of Rap guanine nucleotide exchange factor 5.在这两个蛋白中,m/z 7 604.40为壮族LIDP血瘀证高表达,m/z 5 229.41则为壮族LIDP血瘀证低表达.[结论]壮族LIDP血瘀证患者的血清中存在差异表达蛋白质,依托SELDI-TOF-MS技术平台,结合HPLC-ESI-MS/MS液质联用串联质谱分析可筛选其血清标志蛋白,为研究LIDP中医辨证规律提供了新途径.

作者许建文 ^[1] 尹利军 ^[1] 黄正干 ^[1] 吕建珍 ^[1] 张家立 ^[1] 胡兵 ^[1] 李桂焕 ^[1] 陈静 ^[1] 宋泉生 ^[1] 学术成果认领

作者单位广西中医药大学第一附属医院骨科,中国南宁,530023 ^[1]

关键词腰椎间盘突出症中医辨证蛋白质组学 SELDI-TOF-MS/LC-MS/MS lumbar intervertebral disc protrusion dialectics of TCM proteomics SELDI-TOF-MS/LC-MS/MS

主题词蛋白(Egg White)蛋白质组学(Proteomics)血清(Serum)研究(Research)方法(Methods)

分类号 R681.53

栏目名称 基础研究

DOI 10.3977/j.issn.1005-8478.2013.21.16

发布时间 2013-12-03

基金项目

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