换一批兔脊髓微血管内皮细胞的体外培养及鉴定
Culture and identification of primary rabbit spinal cord microvascular endothelial cells in vitro
摘要目的:建立一种高效的兔原代脊髓微血管内皮细胞(spinal cord microvascular endothelial cells,SCMECs)的体外分离培养方法.方法:选取2周龄日本大耳白兔15只,雌雄不限.在无菌条件下剪开背部皮肤肌肉层,充分暴露脊柱,沿其纵轴方向剪开椎管,获得脊髓组织.剪碎脊髓,用牛血清白蛋白密度梯度离心去髓鞘杂质、筛网过滤获得脊髓微血管段.采用酶促消化法,予0.1％Ⅱ型胶原酶消化微血管段20min后,将其接种于培养皿中,并置于CO2培养箱内静止培养72h.上述操作每次取5只,重复3次,以第3次培养的目的细胞为观察、鉴定对象.通过倒置相差显微镜观察目的细胞生长情况及其形态特征、免疫细胞化学染色法检测细胞第Ⅷ因子相关抗原表达情况,鉴定所培养的目的细胞.结果:接种后的脊髓微血管段镜下呈短棍样或分支状;微血管段培养24h后有短梭形细胞从其周围迁移爬出,呈"出芽式"生长;48h后"岛屿状"的细胞集落形成,增殖迅速;72h后细胞铺满皿底,呈典型的单层、"铺路石样"、镶嵌式排列生长.免疫细胞化学染色显示,99％以上的细胞胞质呈现棕红色,Ⅷ因子相关抗原表达为阳性,苏木素衬染胞核显示为蓝色.结论:酶促消化法可以成功分离培养出活性好、纯度高的日本大耳白兔脊髓微血管内皮细胞.
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关键词
脊髓微血管内皮细胞酶促消化法Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学染色法日本大耳白兔Microvesselsendelial cells of spinal cordEnzymatic digestion methodFactor Ⅷ related antigenImmunocytochemistryJapanese large ear white rabbit
分类号
R-332（实验医学、医学实验）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1004-406X.2025.05.09
发布时间
2025-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（81072714）
福建省自然科学基金资助项目（2017J01545）
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