miR-155-5p靶向核因子κB抑制蛋白E在人单核巨噬细胞抗新生隐球菌免疫反应中的机制研究

Mechanistic study on the role of miR-155-5p targeting IKBKE in THP-1 cells-associated immune response induced by Cryptococcus neoformans

二维码有效期 120s

摘要目的分析新生隐球菌(标准株WM148)干预人单核巨噬细胞(THP-1细胞)中miR-155-5p和核因子κB抑制蛋白E(IKBKE)基因的表达变化,验证其靶向关系,并研究其对肿瘤坏死因子细胞(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的调控作用.方法体外培养THP-1细胞,按照数量5∶1将热灭活新生隐球菌加入培养瓶内,分析0h、3h、6h、9h和12h这5个时间点的miR-155-5p和IKBKE的表达倍数变化以及TNF-α和IL-6的表达量变化;双荧光素酶报告系统验证miR-155-5p和IKBKE 3'UTR的靶向关系;分别转染miR-155-5p mimics和IKBKE siRNA,观察在6 h miR-155-5p和IKBKE的表达倍数变化以及TNF-α和IL-6的表达量变化.结果新生隐球菌干预THP-1细胞后,miR-155-5p表达增加,6h达到峰值,随后逐渐下降,而IKBKE在6h表达降低,TNF-α和IL-6的表达量随时间逐渐增加;双荧光素酶报告系统中miR-155-5pmimics作用后IKBKE 3'UTR活性下降,将IKBKE YUTR进行突变后,IKBKE YUTR活性较野生型增加;分别转染miR-155-5p mimics和IKBKE siRNA后,在6h TNF-α和IL-6的表达量实验组均较对照组明显增加.结论 THP-1细胞中miR-155-5p可通过靶向降解IKBKE 信使RNA(mRNA)促进TNF-α和IL-6的表达增加,表明其在THP-1细胞抗新生隐球菌中发挥着促炎作用,可作为将来隐球菌性脑膜炎的潜在治疗靶点.