过表达ETV2 基因内皮细胞共培养促进口腔鳞癌类器官血管化的实验研究
Study on the effect of overexpressed ETV2 in co-culturing endothelial cells on promoting angiogenesis of oral squamous cell carcinoma organoid
摘要目的:建立口腔鳞状细胞癌(口腔鳞癌,oral squamous cell carcinoma,OSCC)患者来源类器官(patient-derived organoid,PDO)血管化模型,优化临床前研究模型设计.方法:通过慢病毒感染人源脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC),构建过表达ETV2 基因的重组血管内皮细胞(R-VEC).从OSCC手术样本中分离肿瘤细胞,在Matrigel基质胶中进行三维培养,使其自组装为PDO并记录模型生长动态.通过HE染色及免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色检测OSCC标志物(CK56、SMA、Ki67)在PDO模型与患者原发肿瘤组织中的表达差异,评估两者的生物学一致性.将R-VEC与PDO共培养,采用免疫荧光(immunofluorescence,IF)技术检测共培养后PDO的增殖活性及血管网络攀附情况,并通过共聚焦显微镜观察PDO内部的血管结构特征.结果:成功建立R-VEC与OSCC PDO的共培养血管化模型.HE及IHC鉴定显示,该PDO模型与患者原发肿瘤组织的形态学及标志物表达高度一致.血管化PDO模型增殖活性显著增强,传代稳定性提升.HE、IHC、IF及共聚焦实验均证实,血管结构可有效穿行于类器官内部.结论:基于OSCC样本构建的PDO模型能较好地还原患者肿瘤组织块的形态学和生物标志物特征,血管化改造可进一步增强PDO的增殖活性,且不改变其原有的肿瘤生物学特性.
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